无论是美国冻精还是国内冻精，其步骤均差不多，即：首先取精前要进行身体检查，包括传染病筛查（如乙肝、丙肝、艾滋病等）以及肝功能和血型检测。符合条件，就可以正式开始取精了，即男方需禁欲3到5天，然后通过手淫的方式将精子收集到无菌的聚丙烯样品容器中。然后精液进行活力检查，确保其活力不低于标准值。最后，将符合标准的精液放入液氮中进行冷冻保存。
2024美国冻精步骤
1、精子的收集
禁欲期(通常为3～5d)后，用手淫方法将精子收集于10～20mL无菌的聚丙烯样品收集容器中。要求禁欲期是为了更好地冷冻保存样品。通常而言，这样的精子与收集前禁欲期较短及不规则的精子相比，冷冻保存后的特性更恒定且更完善。
2、体积的测量
体积可用较准的加样器或带针头的5mL注射器来测量，有时也可根据收集精液前后采样瓶的重量之差来计算。取0.1～0.2mL精液作精液分析，此外尚需取出一些精液，同时以用来做筛选某种性传染疾病的检测、进行某些检测以筛选导致性病的微生物如奈瑟淋球菌等。
3、甘油化
甘油作为冷冻保护剂，可以分步方式直接加入到未经处理的精液之中。每次加入后混匀，时间间隔为1min;或间接地作为扩张液或基液的组分，经稀释后逐步加入精液。而在美国与加拿大，40%以上的著名精子库，仍单独使用甘油作为冷冻保护剂，而越来越多的新的精子库则使用扩张剂，尤其是含甘油的两性离子缓冲系统。
4、包装和存活力观察
放入液氮冷冻之前，除了要对被冷冻和储备的精子进行分装以外，还需准备一份质量控制检测样品。对收集后未经处理的精液、用冷冻保护剂处理过的精液以及储存前、冻融后的精液均应观察其中的活动精子及其活动力。通过观察能追踪冷冻保存各阶段的精子生存情况，并能确保了解冷冻精子的存活能力。
5、冷冻
吸管、安瓿中的精液冷冻保存时可分散或成组贮存，其位置保持垂直、水平或倾斜。通常是放在液氮气雾中，有时也可放在机械(电子)冷冻柜的冷冻气中。冷却和冷冻过程则可用人工以静态或逐步方式，也可用电脑控制的液氮供给系统来完成。
6、储存
在液氮表面之下-196℃的冷冻精子，活动力没有进一步丢失，人们已经证实癌症患者治疗前精液中的精子冷冻生存活动力往往是差的(解冻后精子活动力百分数降低)，尽管如此，这降低了的运动能力在长期储存期间并不进一步降低。
7、解冻
将装有冷冻精子的包装盒暴露于空气或水中即可使冷冻精液恢复液态。通常暴露在室温，但也可暴露在其他温度下，这要根据各精子库设计的方法学而定。
8、分发
若临床医师需要冷冻精子以开展IVF-ET，精子库应按要求送到该医师所在医院(或)诊所。冷冻精子从精子库的贮存柜取出后应放在预先盛有液氮或固体二氧化碳(干冰)的特殊运送盒内。
